Производство остеобластов грызунов и человека

Разработчик

Сара Э. Б. Тейлор, Миттал Шах и Изабель Р. Оррисс.

Описание технологии

Эта технология предназначена для выделения, культивирования и окрашивания первичных остеобластов из образцов, полученных из организма грызунов и человека неонатального возраста. Анализы свода черепа и длинных костей позволяют проводить прямые измерения отложения и минерализации костной матрицы, а также производить остеобласты на определенных стадиях дифференцировки для молекулярного и гистологического анализа. Культура человеческих остеобластов дает возможность исследовать функцию клеток у целевых групп пациентов. Описанные методы обеспечивают поэтапное руководство, которое указывает, что следует ожидать на каждом этапе культивирования, и выявляет различные условия культуры тканей, необходимые для успешного роста остеобластов из разных источников. Особое внимание в настоящей технологии уделяется методам, используемым для анализа минерализации костей и способам обеспечения того, чтобы неспецифическое отложение минералов или окрашивание не определялось при количественном анализе.

Практическое применение

Человеческие остеобласты, взятые из нескольких анатомических источников в соответствии с этой технологией, могут быть использованы для изучения физиологии остеобластов. Клетки человека, полученные из эксплантатных костных тканей, состоящих из гетерогенной клеточной популяции, которая преимущественно включает в себя ранние остеобласты, можно дифференцировать in vitro в зрелые костно-образующие остеобласты путем добавления глюкокортикоидов, витамина D и костных морфогенетических белков.

Использование человеческих остеобластов позволит исследовать функцию клеток у пациентов, страдающих от возрастных заболеваний костей.

В этой технологии предлагаются способы выделения остеобластов из крысиной голени и длинных костей одного и того же животного.

Эти методы могут быть также адаптированы для успешного культивирования остеобластов мышей, которые требуют дополнительного питания in vitro.

Наконец, технология дает протокол, описывающий, как культивировать первичные остеобласты человека из образцов костей.

Лаборатории

• Department of Orthopaedic Surgery, Stanford University School of Medicine, Stanford (USA)
• Department of Surgery and Cancer, Imperial College London, London (UK)
• Department of Comparative Biomedical Sciences, Royal Veterinary College, London (UK)

Ссылки

Публикации

• Taylor, S.E.B. et al. «Generation of rodent and human osteoblasts." 3 BoneKEy Reports (2014): 585.
• Orriss, I.R., Taylor, S.E., Arnett, T.R. «Rat osteoblast cultures." 816 Methods Mol Biol (2012): 31–41.
• Orriss, I.R. et al. «Optimisation of the differing conditions required for bone formation in vitro by primary osteoblasts from mice and rats." 34 Int J Mol Med (2014): 1201–1208.