Лазер-индуцированная модель хориоидальной неоваскуляризации для изучения возрастной макулярной дегенерации на мышах

Разработчики

Венсан Ламбер, Жюли Леком, Жан-Мари Ракич, Агнес Ноэль и др.

Описание технологии

Стандартный протокол, разработанный в рамках этой технологии может быть применен к трансгенным мышам и включает процедуры с использованием препаратов, рекомбинантных белков, антител, аденовирусов и пре-микроРНК, требующиеся в поиске новых молекулярных регуляторов и идентификации новых мишеней для инновационных методов лечения возрастной макулярной дегенерации. В основе протокола лежит лазер-индуцированная модель хориоидальной неоваскуляризации на мышах, которая широко используется для исследований экссудативной формы возрастной макулярной дегенерации. В основе этой экспериментальной модели in vivo лежит лазерная перфорация мембраны Бруха, в результате чего начинается восполнение субретинальных кровеносных сосудов за счет сосудов хориоидеи. Метод моделирует основные черты экссудативной формы человеческой возрастной макулярной дегенерации и служит основой для тестирования антиангиогенной терапии.

Анализ отличается надежностью и требует 7−14 дней для своего полного завершения в зависимости от использующегося лечения и наличия стадии иммуноокрашивания. Протокол включает подробную информацию о способах индукции хориоидальной неоваскуляризации, включая лазерную индукцию, эксцизионную травму, различные виды обработки, а также подходы к количественной оценке вновь сформированной сосудистой сети.

Практическое применение

Технология имеет явные преимущества перед другими использующимися в настоящее время in vivo моделями. Модель воспроизводит сложные биологические процессы, участвующие в формировании экссудативной формы возрастной макулярной дегенерации (воспаление и ангиогенез) и относительно быстро развивается на легко доступной биологической ткани, которая может применяться в виде, закрепленном на плоскости или подготовленном для гистологического исследования, либо для экстракции белка или нуклеиновых кислот.

В отличие от трансгенных моделей, основанных на суперэкспрессии аполипопротеина E31 или удалении супероксиддисмутазы 1, которые представляют собой длительно протекающие анализы, требующие стареющих животных, лазер-индуцированная модель хориоидальной неоваскуляризации может быть применена к панелям молодых мышей дикого типа или трансгенных мышей (нокаутных или нокинных). Кроме того, вирусы, клетки или соединения, в том числе нейтрализующие антитела, миРНК или мРНК, ре-микроРНК, рекомбинантные белки, наночастицы и лекарства могут быть введены разными путями (с помощью п/к и в/м инъекций, перорально, с питьевой водой, интравитреально, субретинально, с помощью пересадки костного мозга и др.), а также в сочетании с генетическими манипуляциями или без них.

Лаборатории

• Department of Ophthalmology, University Hospital (CHU), Liège (Belgium)
• Laboratory of Tumor and Development Biology, GIGA-Cancer, University of Liège, Liège (Belgium)
• Unit of Molecular Biology and Genetic Engineering, GIGA-Cancer, University of Liège, Liège (Belgium)
• Drug Research Center (CIRM), University of Liège, Liège (Belgium)

Ссылки

Публикации

• Lambert, v. et al. «Laser-induced choroidal neovascularization model to study age-related macular degeneration in mice." 8 Nature Protocols (2013): 2197–2211.
• Lecomte, J. et al. ‘Bone marrow-derived mesenchymal cells and MMP13 contribute to experimental choroidal neovascularization." 68 Cell Mol. Life Sci. (2011): 677–686.
• Noel, A., et al. «Anti-angiogenic therapy of exudative age-related macular degeneration: current progress and emerging concepts." 13 Trends Mol. Med. (2007): 345–352.