BioSens-AllTM: платформа для исследования сигналинга, связанного с GPCR

Разработчики

И. Доранж, Б. Бретон, М. Коупал, М. Фраули, С. Шанн.

Описание технологии

Платформа BioSens-AllTM была разработана для детального исследования сигналинга, связанного с активацией GPCR (англ.: G-protein coupled receptor — рецептор, сопряженный с G-белком). Платформа состоит из биосенсоров на основе BRET (англ.: bioluminescence resonance energy transfer — резонансный перенос энергии флуоресценции), каждый из которых отслеживает одно специфическое сигнальное событию при активации GPCR.

1. В микроплашках клетки подвергаются совместной трансфекции двумя векторами: вектором, экспрессирующим естественную ДНК-последовательность GPCR (метка не нужна) и вектором для экспрессии желаемых биосенсоров.
2. После временной экспрессии белка (через 48 часов после трансфекции) к культурам клеток добавляются определенные соединения и измеряется активность биосенсоров.

Платформа BioSens-AllTM предлагает гибкий набор услуг. Она BioSens-AllTM содержит более 25 биосенсоров и представляет собой уникальный интегрированный функциональный тест, предназначенный для характеристики сигналинга, связанного с GPCR. Платформа позволяет осуществить специализированные исследования, меняя количество и тип биосенсоров в зависимости от потребностей ученых. Внутриклеточные события, которые можно измерять с помощью BioSens-AllTM, включают:

• активацию белков Gαs, Gαi1, Gαi2, Gαi3, GαoA, GαoB,
• рекрутинг β-арестина 1 и 2,
• выработку цАМФ и кальция,
• активность эффекторов TPR1, GRK2/3, PKC, p63, мерлин и p115.

Преимущества исследований с использованием платформы BioSens-AllTM:

• можно быстро определить сигнальные характеристики выбранного GPCR (например, дикий, мутантный или ортологический тип),
• нет системных ошибок, связанных с использованием разных платформ (все клеточные события измеряются на одной платформе),
• нет структурных модификаций рецептора.

Практическое применение

Технология может найти широкое применение в поиске лекарственных соединений. Платформа BioSens-AllTM может использоваться в таких областях исследований:

• изучение влияния ортостерических и аллостерических соединений,
• исследование сигнальных характеристик рецепторов дикого типа по сравнению с мутантными вариантами,
• определение сигнальных характеристик орфанных рецепторов (деорфанизация),
• обнаружение конституитивной активности рецептора и пр.

Лаборатории

Domain Therapeutics, Neomed Institute, Montreal, Quebec, (Канада)

Ссылки

http://www.domaintherapeutics.com/research-and-technology/biosens-all.html

Публикации

Dorange, Ismet, et al. «BioSens-All ™: A new technology dedicated to GPCR biased ligand drug discovery." ABSTRACTS OF PAPERS OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY. Vol. 248. 1155 16TH ST, NW, WASHINGTON, DC 20036 USA: AMER CHEMICAL SOC, 2014.
Franchet, Christel, and Ismet Dorange. «GPCR binding technologies: an overview." Current topics in medicinal chemistry 15.24 (2015): 2476–2483.